湖南农业大学分析测试中心-文件下载

时间: 2011/05/30 作者: admin 点击: 次

分析测试中心大型仪器设备标准操作规程SOP
仪器名称、型号： 7300荧光定量PCR仪生产厂家及编号：美国ABI，20088652		页码：1/2
		第1版第1次修改
		文件编号：
制定人：王晓君	审核人：柳亦松	批准人：
制定日期：2011.4	审核日期：2011.4	批准生效日期：
制定部门：分析测试中心存放地点：湖南农业大学生命科学楼三楼南313

一、仪器操作

1、开计算机开主机电源双击ABI Prism 7300 SDS 软件。

2、在 New Document Wizard 窗口中选择 Assay 等

3、设定完成后按下 Next ，选择 Detector 按下 Add 将Detector 加入 Plate Document 按下Next。

如要设定新 Detector 则按下New Detector 选择新Detector。

4、选定 Plate Document 中放样品的 Wells后选定适当的Detector，击Detector 列中的 Use 框从Task 栏中选择种类：Unknown、 NTC 或 Standard。

5、输入样品名称可从 View 列中选择 Well Inspector。

同名称者，软件即视为重复样品，会自动计算平均值及标准偏差。

6、若此 Plate Document 常用，可将其存成 Template。从File menu 下选 Save As，输入文件名并存成 SDS Templates

(*.sdt) 格式。

7、若不存成 Template，则先存下此 Plate Document 从File 下选 Save As，并将档案种类存成 SDS Document (*.sds) 格式。

8、检查 PCR 条件，将样品盘放入机器中，并准备收集 data。

在 Plate Document 上击Instrument，进入 PCR 设定窗口。

若要更改温度及时间，可击 Add Cycle, Add Hold 或 Add Step；

若为 SYBR 的反应，则击Add Dissociation；

收集讯号可在 Results 下击 Amplification Plot，收集过程中可同步观察 Amplification Plot。

9、再存一次后，按下 Start 即开始进行 PCR 及讯号之收集。

10、结果分析：收集data，检视 Amplification Plot 或其它 data。

若 data 已分析完成，在 Amplification Plot 中 Threshold 为綠色线；红色线表示未分析。

输出或列印结果：若 data 有问题时，可检视 Spectra 或Component data，设定 baseline 及threshold，重新分析。

二、注意事项:

1. 在 ABI 7300 上可使用 96 well plate 或单一的 PCR tube，当使用单管的 tube 时可直接上机或配合 tray/retainer 一起使用。

2. 管子及盖子上请勿标记任何记号，以免墨色脱落，沾到 PCR block

上增加背景值。

3. 定期以棉花棒沾超纯水清洁 PCR block 以增加侦测灵敏度。

4. 为确保机器侦测的灵敏度，每月重新 run 一次 background plate

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